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双缩脲反应的原理是两分子尿素加热至180℃后，形成氨气和双缩脲，在碱性条件下，铜离子与双缩脲结合形成红紫色的络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，故能发生此反应。因所产生的颜色深浅与参与反应肽键数成比例，可定性或定量分析蛋白质浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。

双缩脲试剂由Biuret Reagent A和Biuret Reagent B组成，主要成分为氢氧化钠、硫酸铜和去离子水。如果组织中含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法，多用于定性检测蛋白质。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 尿素、蛋白质溶液(鸡蛋清溶液，蛋清和水的比例为1:9)、蒸馏水、蛋白标准
  
• 酒精灯、试管、石蕊试纸、分光光度计或酶标仪、比色皿或酶标板、移液器、滴管

• 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深，显色反应也会随温度升高而加快。
  
• 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
  
• Biuret Reagent A有腐蚀性，需小心操作。
  
• Biuret Reagent B不可过量，易生成蓝色沉淀，又可吸附紫红色复合物，干扰颜色的观察。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 取少许结晶尿素，放入干燥的试管中，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，放出的氨可用红色石蕊试纸检测，至试管内出现白色固定停止加热，冷却。然后加入1mL Biuret Reagent A，振荡均匀，以便产生碱性环境。再加入1～2滴(约0.05～0.1mL) Biuret Reagent B，边加边震荡，观察有无紫红色出现。
  
• 另取一试管，加入1mL待测样品(鸡蛋清溶液)，再加入1mL Biuret Reagent A，振荡均匀，以便产生碱性环境。再加入2～3滴(约0.1～0.15mL) Biuret Reagent B，边加边震荡，并观察紫红色出现的时间。
  
• 如果需要准确测定蛋白含量，可采用分光光度计或酶标仪，测定540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm的波长也可，根据标准曲线可计算出样品的蛋白浓度。